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共創(chuàng)共贏
氯霉素是一種抑菌性廣譜抗生素，常被用于畜禽動物及水產品的疾病治療和預防；甲硝唑為硝基咪唑類藥物，常被加入動物飼料中以驅除動物體內的寄生蟲，因而造成動物源性食品中的藥物殘留。我國農業(yè)部第235號公告中已將甲硝唑和氯霉素列為不得檢出藥物，并規(guī)定了其他藥物的殘留*。
目前檢測甲硝唑、氯霉素類藥物方法很多，但由于甲硝唑、氟苯尼考胺和氯霉素的性質差異比較大，同時檢測的方法很少。迪馬科技在參考各種標準和文獻基礎上，建立了SPE-UPLC -MS/MS法測定雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類獸藥殘留，采用90% 乙腈水提取，ProElut DPC-2固相萃取柱凈化樣品，收集流出液，Leapsil C18色譜柱分離檢測。方法特點如下：
1）前處理步驟少，提取液直接通過凈化柱接收流出液即可；
2）有機溶劑消耗量小，前處理過程中也無需使用酸堿試劑；
3）使用ProElut DPC-2凈化柱能夠有效的除掉雜質，凈化效果優(yōu)異；
4）分析條件簡單，可以一個流動相正負離子同時檢測，大大提高工作效率，減少實驗成本；
5）方法定量限是0.5 μg/kg。
以下為詳細解決方案，敬請參考！
雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類藥物殘留的檢測SPE-UPLC-MS/MS法
1、適用范圍
本方案適用于雞肉和雞蛋中甲硝唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測。
2、標準品配制
(1) 單標儲備液1.0 μg/mL：準確稱取適量各標準品，用甲醇配制成1.0 μg/mL的單標儲備液；
(2) 混標儲備液200 μg/L：分別吸取各單標儲備液，用乙腈配制成200 μg/L混標儲備液；
(3) 混標中間液20 μg/L：準確吸取適量混標儲備液200 μg/L，用乙腈配制成20 μg/L的混標中間液。
3、提取
(1) 取5.0 g樣品，加入20 mL 90% 乙腈水溶液，振蕩5 min，超聲5 min，6000 rpm離心
2 min，取出上清液；
(2) 向上清液中加入10 mL乙腈飽和正己烷溶液，振蕩2 min，6000 rpm離心2 min，取下層清液約10 mL，待凈化。(雞蛋樣品加入正己烷后離心后可能會有果凍層，可以先將澄清的正己烷層吸去，然后混勻再離心)
4、凈化—— ProElut DPC-2 12 mL (Cat#: 65940)
小柱不需要活化，取10 mL待凈化液加入柱中，接收8 mL流出液；將接收的流出液在40 ℃水浴條件下氮吹至1 mL以下即可，用水定容至1 mL，過微孔濾膜(Nylon)上機分析。
注：同方法制備基質匹配標準溶液。
5、分析條件
UPLC 條件
色譜柱：Leapsil C18, 100 x 2.1 mm, 2.7 μm (Cat#：86005)
流 速：0.3 mL/min
進樣量：10 μL
柱 溫：40 ℃
流動相：A: 10 mmol/L乙酸銨 B: 乙腈
梯度設置
| 時間/Min. | 0 | 2 | 6 | 7 | 7.5 | 13 |
| A (%) | 90 | 90 | 25 | 10 | 90 | 90 |
| B (%) | 10 | 10 | 75 | 90 | 10 | 10 |
質譜條件
電離模式：ESI 掃描方式：正/負離子掃描
檢測方式： 多反應監(jiān)測 電噴霧電壓：5500 V/-4500 V
霧化氣壓力：50 psi 輔助氣壓力：50 psi
氣簾氣壓力：20 psi 離子源溫度：500 ℃
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
藥物名稱 | 定性離子對 (m/z) (母離子/子離子) | 定量離子對 (m/z) (母離子/子離子) | 碰撞氣能量/eV | 去簇電壓/V |
甲硝唑 | 172.0/127.8 | 172.0/127.8 | 20 | 50 |
172.0/81.9 | 32 | |||
氟苯尼考胺 | 247.9/230.0 | 247.9/230.0 | 15 | 72 |
247.9/130.1 | 28 | |||
氯霉素 | 321.0/151.8 | 321.0/151.8 | -24 | -80 |
321.0/256.9 | -15 | |||
甲砜霉素 | 354.0/184.8 | 354.0/184.8 | -26 | -80 |
354.0/289.8 | -16 | |||
氟苯尼考 | 355.8/335.9 | 355.8/335.9 | -13 | -70 |
6、添加回收結果
雞蛋中甲硝唑和氯霉素類檢測的添加回收結果（%）
雞肉中甲硝唑和氯霉素類檢測的添加回收結果（%）
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雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5 種獸藥檢測基質匹配標準品1.0 μg/L 的XIC 圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
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添加水平為0.5 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
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雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測基質匹配標準品10.0 μg/L的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
添加水平為5.0 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測基質匹配標準品1.0 μg/L的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
添加水平為0.5 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測基質匹配標準品10.0 μg/L的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
添加水平為5.0 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）
雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類藥物殘留的檢測相關產品信息：
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
樣品前處理 | ||
65940 | 食品中獸藥檢測柱 ProElut DPC-2 | 12 mL, 20/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米, 2 L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
37177 | ProMax針頭式過濾器Nylon | 13 mm, 0.22 μm 100/pk |
標準品 | ||
50P-C15201000 | 甲硝唑[443-48-1] | 250 mg |
50D-OP079-10 | 氟苯尼考胺[76639-93-5] | 10 mg |
50P-C11120000 | 氯霉素[56-75-7] | 250 mg |
50D-223121 | 氟苯尼考[76639-94-6] | 250 mg, 98.5% |
50P-C17457000 | 甲砜霉素[15318-45-3] | 100 mg |
色譜柱及保護柱 | ||
86005 | UHPLC/HPLC兼容色譜柱 Leapsil C18 | 100 x 2.1 mm, 2.7 μm |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50101 | 乙腈 HPLC級 | 4 L |
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50115 | 正己烷 HPLC級 | 4 L |
50138 | 乙酸銨 HPLC級 | 100 g |
通用色譜產品 | ||
52401B | 瓶架/藍色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
5321 | 螺紋口進樣瓶, 透明帶刻度和書寫 | 2 mL, 100/pk |
5324 | 樣品瓶蓋/含墊 (白色PTFE/紅色橡膠隔墊) | 100/pk |
H80465 | HPLC 進樣針 | 25 μL
|
